展示技術(shù)廣泛用于抗體的高通量篩選。目前常用的噬菌體展示和酵母展示技術(shù)主要用于展示單鏈可變區(qū)抗體片段(ScFv),通過展示技術(shù)篩選出的抗體片段,需要進行結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換,將抗體片段結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換成IgG全長抗體結(jié)構(gòu),應(yīng)用于抗體藥物開發(fā)。但是通過結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換形成的IgG全長抗體可能會失去活性,需要對轉(zhuǎn)換后的IgG全長抗體進一步進行體外成熟優(yōu)化,才能篩選出具有高親和力的抗體。最直接有效的策略是通過展示IgG全長抗體,進行體外親和力成熟優(yōu)化篩選。動物細胞可以用于展示IgG全長抗體,進行體外親和力成熟優(yōu)化篩選。但是與噬菌體展示和酵母展示技術(shù)相比,動物細胞展示技術(shù)通量小,操作難度大,周期長,成本高,無法高效達到體外親和力成熟的目標。
我們基于糖工程畢赤酵母技術(shù),用糖工程畢赤酵母代替動物細胞,開發(fā)出IgG全長抗體酵母展示技術(shù)平臺,用它可以代替噬菌體和傳統(tǒng)的酵母展示技術(shù),構(gòu)建大容量人源IgG全長抗體庫,進行高通量親和力體外成熟篩選,選出的高親和力、高表達IgG全長抗體不需要結(jié)構(gòu)形式改變,可以直接表達生產(chǎn)進行動物實驗和臨床實驗,是一種穩(wěn)定高效的抗體親和力成熟系統(tǒng)。
我們是目前全球少數(shù)幾家能提供IgG全長抗體酵母展示技術(shù)的企業(yè),可以對外提供涵蓋抗體人源化、抗體親和力成熟、抗體表達生產(chǎn)在內(nèi)的抗體基因工程改造一站式服務(wù)。
IgG全長抗體酵母展示技術(shù)具有其他展示技術(shù)所沒有的潛在優(yōu)勢:
1、糖工程畢赤酵母具有類似于動物細胞的真核表達系統(tǒng)質(zhì)量控制機制,能夠確保抗體的正確空間結(jié)構(gòu)折疊,具有人源N-糖基化等多種翻譯后加工功能,因而展示的IgG抗體在分子結(jié)構(gòu)、理化特性 和生物學功能方面最接近于天然抗體,可以直接用于動物實驗和臨床試驗。但是噬菌體是原核表達系統(tǒng),只能展示ScFv等抗體片段,通過結(jié)構(gòu)轉(zhuǎn)換形成的IgG抗體可能會失去活性。
2、與動物細胞展示技術(shù)相比,IgG全長抗體酵母展示技術(shù)具有抗體庫容量大,操作簡單,周期短,成本低,能高通量篩選IgG全長抗體。
3、酵母展示系統(tǒng)采用FACS分選技術(shù),基于IgG抗體親和力及展示水平進行篩選,可以消除表達水平不同引起的偏差,而且能區(qū)分親和力差異很小的克隆。但是噬菌體展示篩選抗體時,表達水平的不同會影響抗體親和力的篩選。
4、采用FACS分選技術(shù)能夠一次直接分選高、中、低親和力的克隆。
5、通過使用雙染色的FACS,可以直接用酵母展示抗體確定抗體親和力,不需要進行耗時的亞克隆、表達和純化。